分享Waters液相色譜柱的選擇方法和條件！
更新時間：2022-06-28 點擊次數：2046次
Waters液相色譜柱用于快速分離混合極性樣品，與C8或C18柱相比，疏水性較小，通常可使用水相成分高的洗脫液。對非極性化合物表現了更短的保留時間，對極性化合物幾乎沒有明顯影響。它是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據不同組分在流動相和固定相之間的分配系數的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數的公式同樣適合于高效液相色譜。
目前本產品的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。
Waters液相色譜柱選擇的方法和條件：
1、填料基質：
a、硅膠基質：純度高本錢低，強度大，化學修飾輕易，但pH值范圍有限。大多硅膠基質填料在pH2-8之間穩定，但經過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
b、聚合物基質：應用pH值范圍寬，溫度穩定，機械強度小。
2、顆粒外形：大多現代HPLC填料都是球形顆粒，但有時是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時；不規則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。
3、顆粒粒徑：粒徑越小柱效越高、分離度越高，但同時會導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品，UPLC可以使用1.5μm的填料；另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
4、含碳量：含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復雜樣品；低含碳量分析時間短、展現不同的選擇性，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
5、孔徑和比表面積：HPLC吸附介質是多孔的顆粒，盡大多數的反應表面于孔內。因此，分子必須進進孔內才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念。孔徑小比表面積大，反之亦然。比表面積大，增加樣品與鍵合相之間的反應，增加保存，上樣量和復雜成分的分離度；比表面積小，平衡時間快，適合梯度分析。
6、孔容和機械強度：孔容，又稱“孔體積”。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應填料的機械強度。孔體積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱。孔體積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
7、封端封端：封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產生的拖尾峰。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產生不同的選擇性，尤其是極性樣品。
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